براساس استفاده از میکروپیپت با قطر nm 50 باعث انتقال مقداری محلول حاوی DNA به سیتوپلاسم و هسته سلول های مورد نظر می باشد.
محلول نگهداری DNA شامل 10 میلی مول Tris-Hcl و 1/ 0میلی مول EDTA و در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری میباشد و حاوی 2 نانو گرم بر میکرو لیتر DNA می باشد.
میکروپیپت از محلول حاوی DNA پر میشود و سپس حدود 2-1 پیکولیتر با فشار سرنگ تزریق می شود. با استفاده از میکروسکوپ اینورت عملیات انتقال بررسی می شود. سلول ها با پلی L لیزین یا لایه نازکی از آگار محکم می شود. در این روش DNA بطور مستقیم و بصورت مکانیکی به درون یک هدف نظیر جنین ، تخمک، مریستم، و یا درون توده ای از پروتوپلاست ها یا سلول ها فرستاده می شود.
مزایای روش میکرواینجکشن
– دقت بالا
– عدم نیاز به تیمار اولیه
-عدم وابستگی این روش به میزبان
– ترانسفورم سلول ها با فرکانس بالا می باشد و نیاز به تعداد کمی سلول داریم .
– از این روش در جهت انتقال اندامک های سلولی و کروموزوم های جداسازی شده ،استفاده می شود
معایب روش میکرواینجکشن
-از معایب این روش سختی این روش است و از طرفی به وسایل گرانقیمت نیاز دارد.
– عیب اصلی این روش کند بودن ونیازمند مهارت می باشد.
وسایل مورد نیاز
از وسایل مورد نیاز در این روش می توان به صفحه انتقال ،میکروسکوپ اینورت،میکرو نگهدارنده،ژل آگار یا پلی ال لایزین برای نگه داشتن نمونه،وسیله تولید فشار،میکروپیپت وبافر بازیابی (که شامل 7.2mm HEPES PH5، 32mMCaCl، 66mM NaCl،KClوگلوکز) اشاره کرد.
